试剂盒简介
biospin
rna simply p 提取试剂盒是一种总rna提取试剂,可直接用于血液、动物/植物组织、培养细胞、细菌等细胞或组织中的总rna提取。处理好的样本通过加入solution
r2处理后直接过柱，即可得到总rna。
biospin
rna simply p 提取试剂盒操作简便易行,可以同时处理多个样品,得到高质量的rna。纯化的rna可以直接用于rna
印迹分析、斑点杂交、poly(a)+
选择、体外翻译、rna酶保护分析rt-pcr分析、构建cdna文库等rna研究。
产品特点
-
simplyp是一种离心柱法提取总rna；
-
simplyp采用独特的中裂解液，使得该试剂盒可室温保存2年，而不影响品质；
-
simplyp采用特殊的高分子膜材料选择性吸附rna的离心柱提取方法，保证了rna的纯度、利率和稳定性
-
simplyp整个操作过程简单易行，保证了提取的rna质量不受操作者的熟练程度影响
储存与运输条件
î
biospin rna simply p 提取试剂盒于室温保存，有效期为2年。
î
可在常温下运输。
基本技术参数
|
提取方法 |
操作时间 |
离心柱容积 |
得率 |
|
离心柱 |
7~15分钟内完成 |
750µl |
≥90％ |
|
样本 |
样本量 |
|
血液 |
0.1~10ml |
|
动/植物组织 |
3~30mg |
|
培养细胞 |
≤1×107细胞 |
|
体液 |
1~10ml |
|
细菌 |
1ml |
常见问题及对策
1.试剂盒室温保存，保质期2年。
2.离心速度均为12,000rpm－14,000rpm，室温离心（有条件可4℃离心）。
3.首次使用时在wash
buffer瓶中加入标签标明量的无污染的分析纯无水乙醇，拧紧瓶盖，并混合均匀。
4.避免环境中rna酶污染，操作要戴手套，所有枪头和eppendorf管以depc水处理，移液枪保证洁净无rna酶污染。如果把试剂放在超净台（普通超净台或专用的桌面pcr超净台）中操作，可以有效减少rna酶污染。
5.对细胞量2×106以下，或组织6mg以下，按照上述标准流程操作；对更多量的细胞和组织，有以下两种方案：a.
提取细胞浆rna（操作流程1d），可以一次处理1×107细胞、30mg组织（甚至更大量）。由于rna
90%以上存在于细胞胞浆中，因而此方法可以提取获得绝大部分rna，除有特殊要求提取其它部位rna的实验外，一般均可选用此方法；b.
按细胞量每2×106，或组织每6mg加入r2液600μl。例如1×107细胞加入r2液3000μl，充分颠倒混匀2min，分5次取600μl移入同一离心柱离心；或者分取600μl同时加入5支离心柱离心。后续提取过程按照上述标准流程操作。
7.有时实验者发现样本中加入r2液后，出现白色絮状、丝状沉淀，这是dna析出，对rna提取影响不大。避免这种情况的方法是：降低细胞密度（不要超过2×107细胞/ml），加入r2液前充分振荡混匀细胞悬液，加入r2液后稍等片刻后再振荡。
8.样本裂解物加入离心柱中离心1min结束后，如管中仍有液体，表明样本超量或裂解不完全导致吸附膜阻塞。处理方案是：a.减少样本量；b.加入r2液后充分震荡；c.如已发生阻塞又不想放弃此标本，可用加样枪头划破离心柱膜的表层，再重新离心1min。
9.尽量保证在膜中央加入洗脱液25μl-100μl，低于25μl将不能保证吸附膜被充分浸润。
10.如果获得的总rna出现有基因组dna污染，表明操作失误，如样本中液体量超过200μl（一般加入100μl－150μl），或者r2液量少于500μl（要求加入600μl）。
11.提取的总rna置于4℃或冰浴中，立即用于下游实验（如rt-pcr）；或立即置于-80℃冰箱保存，数天内尽快使用。无论采用何种方法提取和保存的rna，都往往会被很快降解，因而建议避免提取rna后保存。建议先将标本（细胞、组织）保存在rna保存液或液氮中，来保证rna质量不受影响，用试剂盒抽提仍可以获得高质量的总rna。
